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Protein G是一种分离自G Streptococci的细胞壁蛋白，它可通过其Fc片段结合哺乳动物IgG。
重组protein G含有高亲和结合位点，减少了非特异性吸附。
Protein G和Protein A有不同的lgG结合特性，相比Protein A， Protein G对牛、羊、马等多克隆抗体有更强的结合力，
它还可以结合不能与Protein A很好结合的大鼠lgG、人lgG3和小鼠lgG1，具体结合能力见表2。
Protein A和Protein G对不同抗体的结合能力
种属 | 亚型 | Protein A 结合力 | Protein G 结合力 |
Human | IgA | varible | — |
IgD | — | — | |
IgE | — | — | |
IgG1 | ++++ | ++++ | |
IgG2 | ++++ | ++++ | |
IgG3 | — | ++++ | |
IgG4 | ++++ | ++++ | |
IgGM | varible | — | |
Avian egg yolk | IgY | — | — |
Cow |
| ++ | ++++ |
Dog |
| ++ | + |
Goat |
| — | ++ |
Guinea pig | IgG1 | ++++ | ++ |
IgG2 | ++++ | ++ | |
Hamster |
| + | ++ |
Horse |
| ++ | ++++ |
Koala |
| — | + |
Liama |
| — | + |
Monkey(rhesus) |
| ++++ | ++++ |
Mouse | IgG1 | + | ++++ |
IgG2a | ++++ | ++++ | |
IgG2b | +++ | +++ | |
IgG3 | ++ | +++ | |
IgM | variable | — | |
Pig |
| +++ | +++ |
Rabbit | no distinction | ++++ | +++ |
Rat | IgG1 | — | + |
IgG2a | — | ++++ | |
IgG2b | — | ++ | |
IgG3 | + | ++ | |
Sheep |
| +/- | ++ |
++++=结合能力强; ++=结合能力中等; —=结合能力弱或没有结合
问题及解决方案
问题 | 原因分析 | 推荐解决方案 |
柱子反压过高 | 筛板被堵塞 | 清洗或更换筛板 |
填料被堵塞 | 按照第3部分进行树脂清洗 | |
裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上柱前使用滤膜 (0.22或0.45μm) 过滤，或者离心去除。 | ||
样品流速过低 | 样品或缓冲液中有气泡 | 去除样品或柱子中的气泡 |
样品和缓冲液进行脱气 | ||
洗脱组分中没有目的蛋白 | 样品中抗体浓度太低 | 使用其抗原做配体的介质 |
抗体被降解 | 适当的提高洗脱pH； 将样品脱盐或透析到合适的Buffer中 | |
样品与Protein G结合能力较弱 | 更换介质，如rProtein A Beads进行纯化 | |
回收率逐渐减低 | 上样量太多 | 减少上样量 |
柱子太脏，载量降低 | 按照第3部分进行树脂CIP清洗 |
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